Pembubaran polipeptida
Setiap asid amino mempunyai sifat kimia yang wujud dan keterlarutan peptida bergantung pada urutan dan pengubahsuaiannya. Kami mengesyorkan mengambil sedikit peptida untuk ujian keterlarutan sebelum melarutkan semua peptida.
Melarutkan peptida adalah langkah yang sangat penting. Pelarutan yang tidak betul boleh mengakibatkan kehilangan peptida atau kegagalan eksperimen. Keterlarutan peptida terutamanya bergantung pada urutan peptida, jadi perhatikan apabila mereka bentuk peptida. Adalah disyorkan bahawa urutan peptida harus mengandungi 20% sisa bercas untuk meningkatkan keterlarutannya.
Sebelum digunakan, pelanggan boleh mengikuti tiga prinsip asas berikut untuk memilih pelarut yang sesuai untuk membubarkan peptida.
Pertama, pelarut yang dipilih mesti dapat membubarkan peptida sepenuhnya; Kedua, pelarut yang dipilih mestilah serasi dengan keadaan eksperimen; Akhirnya, pelarut yang dipilih tidak boleh bertindak balas dengan atau merendahkan peptida.
Selagi jumlah peptida membenarkan, anda boleh terlebih dahulu membubarkan sebahagian kecil peptida dan kemudian melarutkan keseluruhan sampel. Jika anda perlu mendapatkan semula peptida daripada pelarut, anda boleh memilih pelarut awal yang memudahkan ia dikeluarkan selepas lyophilization.
Cadangan berikut boleh membantu anda melarutkan peptida:
Peptida dengan kurang daripada 5 asid amino biasanya larut dalam larutan akueus, dan asid amino hidrofobik kuat (W, I, L, F, M, V, Y) kecuali.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25%Asid amino bercas (E, D, K, R, H) peptida hidrofilik dan mengandungi<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25%Asid amino bercas juga mungkin tidak larut atau separa larut dalam air. Adalah lebih baik untuk terlebih dahulu melarutkan peptida dalam jumlah minimum pelarut organik yang kuat seperti DMF, ACN, Isopropil alkohol, etanol, asid asetik, 4-8 M GdnHCl, urea atau DMSO (bukan dalam urutan C, W, M ), dan pelarut organik lain yang serupa. Adalah lebih baik untuk menambah perlahan-lahan pelarut organik yang melarutkan peptida ke dalam larutan akueus setitik demi setitik. Jika larutan menjadi keruh, ia mungkin telah mencapai had keterlarutan dan tidak ada gunanya untuk terus melarutkannya. Perlu diingatkan bahawa pelarut yang dipilih pada mulanya harus serasi dengan sistem eksperimen.
Hydrophobic amino acid content >75%Peptida hidrofobik kuat secara amnya juga tidak larut dalam larutan akueus. Peptida sedemikian juga harus dirawat terlebih dahulu dengan pelarut organik yang kuat (cth. TFA, asid Formik) larut dan mungkin juga mendakan jika ditambah kepada larutan akueus. Penyelesaian peptida akhir mungkin memerlukan kepekatan tinggi pelarut organik untuk menyahnaturasinya, dan pelarut organik biasanya tidak digunakan untuk kajian fungsi biologi dalam sel hidup.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) Urutan polipeptida cenderung membentuk rangkaian ikatan hidrogen antara molekul yang berlebihan dan mudah membentuk gel dalam larutan akueus pekat. Peptida sedemikian boleh dilarutkan seperti yang diterangkan dalam langkah 3. Untuk mengurangkan kemungkinan masalah semasa pembubaran, adalah disyorkan agar pelanggan memberi lebih perhatian kepada reka bentuk dan urutan untuk meningkatkan keterlarutan peptida.