Reagen untuk pemeluwapan peptida

Pada masa ini, dalam sintesis peptida, kaedah pengaktifan karboksil digunakan terutamanya untuk menyelesaikan tindak balas peptida. Kaedah terawal yang digunakan ialah mengaktifkan asid amino kepada asid klorida, azida, anhidrida simetri dan anhidrida asid campuran. Walau bagaimanapun, disebabkan kewujudan rasemisasi asid amino di bawah keadaan ini, bahaya reagen tindak balas dan kerumitan penyediaan, ia secara beransur-ansur digantikan oleh reagen pemeluwapan kemudian, yang boleh dibahagikan kepada dua jenis mengikut strukturnya.: Reagen pemeluwapan utama ialah: Jenis Carbodiimide, jenis garam onium (Uronium).

Terutamanya termasuk: DCC, DIC, EDC.HCl tunggu. gunakan DCC menjalankan tindak balas, disebabkan DCU, wujud DMF Ia mempunyai keterlarutan yang sangat sedikit dan menghasilkan mendakan putih, jadi ia biasanya tidak digunakan dalam sintesis fasa-pejal. Walau bagaimanapun, kerana ia murah, ia boleh dialih keluar melalui penapisan dalam sintesis fasa-cecair, dan ia masih digunakan secara meluas. EDC.HCl Kerana keterlarutan airnya, ia sering digunakan dalam sambungan polipeptida dan protein, dan ia juga agak berjaya. Walau bagaimanapun, salah satu kelemahan terbesar jenis reagen pemeluwapan ini ialah jika digunakan secara bersendirian, akan terdapat lebih banyak tindak balas sampingan. Walau bagaimanapun, penyelidikan menunjukkan bahawa jika ditambah semasa proses pengaktifan HOBt, HOAt Reagen sedemikian boleh mengawal tindak balas sampingan kepada julat yang sangat rendah. Mekanisme tindak balas adalah seperti berikut:

Rajah 2 Mekanisme tindak balas Pengaktifan DIC

Reagen pemeluwapan jenis garam onium mempunyai kereaktifan tinggi dan kelajuan pantas, dan kini digunakan secara meluas, terutamanya termasuk: HBTU, TBTU, HATU, tunggu PyBOP. Semasa penggunaan reagen ini, bes organik perlu ditambah, seperti diisopropylethylamine (DIEA), N- Methylmorpholine (NMM), Asid amino boleh diaktifkan hanya selepas reagen ini ditambah. Mekanisme tindak balas adalah seperti berikut:

Resin yang digunakan dalam sintesis peptida fasa pepejal-umumnya ialah bahan polistirena-divinilbenzena, dengan saiz antara 75 hingga 150 μm, Tahap pemautan silang-adalah antara 1-2%, dan kebanyakan yang digunakan sekarang ialah 1%, kerana pada tahap ini DM mempunyai pemautan silang yang baik,{8}} sifat bengkak dan mempunyai struktur rangkaian-tiga dimensi, dan molekul bahan tindak balas boleh bergerak bebas di dalam resin. Bahagian resin yang paling kritikal ialah lengan penghubung, yang disambungkan ke resin pada satu hujung dan berfungsi sebagai tapak tindak balas di hujung yang lain. Resin yang digunakan secara meluas pada masa ini ialah: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA tunggu. dalam PAM, MBHA digunakan dalam strategi BOC, kerana ia sangat stabil kepada asid, ia perlu HF, TFMSA Ia hanya boleh dipotong di bawah keadaan asid yang kuat.

Selepas sintesis peptida-pepejal selesai, reagen belahan yang sesuai mesti dipilih untuk membelah peptida daripada resin, dan kemudian mendakan dengan eter glasier, mengumpul mendakan melalui sentrifugasi dan HPLC Asingkan, tulen dan bekukan-kering untuk mendapatkan produk peptida akhir.

Oleh kerana resin dan jujukan asid amino berbeza yang dipilih, kaedah belahan yang dipilih semasa pembelahan tidak betul-betul sama. Secara amnya, keadaan belahan dipilih dalam keadaan berasid. Untuk PAM, MBHA Resin, biasanya digunakan HF Cutting, p-cresol, p-mercaptophenol, anisol dan reagen lain perlu ditambah semasa proses pemotongan. Dan untuk Wang, Rink-Amide, Trt Resin, biasanya digunakan TFA Cutting, tambah etilena glikol, anisol sulfida, air, triisopropilsilane, fenol, dsb. semasa proses pemotongan.

Reagen aditif ini digunakan terutamanya sebagai reagen penangkapan karbokation. Tujuannya adalah untuk menangkap karbokation yang dihasilkan semasa tindak balas pembelahan dan mengurangkan tindak balas sampingan yang disebabkan oleh serangan ion karbokation ini pada beberapa rantai sampingan asid amino. Asid amino yang lebih berkemungkinan menghasilkan tindak balas sampingan termasuk: Trp, Tyr. Dos reagen pemotong biasanya 10-15 ml/g resin.

Nisbah pemotongan yang biasa digunakan: HF/p-cresol/p-thiocresol(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2.5/2.5), Tindak balas biasanya dijalankan pada suhu bilik 2 h-4j.

Dalam sintesis peptida-pepejal, kita sering menghadapi masalah kegagalan sintesis peptida atau kecekapan sintesis yang rendah. Sebab utama adalah disebabkan oleh jujukan peptida, kerana beberapa jujukan peptida terbentuk pada resin. -Lipatan mengubah sifat bengkak resin, dan mungkin juga menimbus tapak aktif tindak balas dalam resin, menjadikannya sukar untuk tindak balas diteruskan. Laporan semasa menunjukkan bahawa

Gunakan pelarut campuran, larutan DMSO/DMF, 6N Guanidine /DMF

Tingkatkan suhu tindak balas atau gunakan kaedah gelombang mikro

Gunakan garam chaotropic, LiCl, NaClO4 tunggu.

Gunakan yang mempunyai sifat bengkak yang lebih baik PEG-PS resin, sambil mengurangkan pemuatan resin (0.05-0.2 mmol/g)

​