Dua kaedah untuk membelah peptida daripada resin fasa pepejal-
Kaedah untuk membelah polipeptida daripada resin fasa-pejal
fasa pepejal Fmoc Selepas mensintesis peptida secara kimia, terdapat banyak kaedah pembelahan. Sekarang kami akan memperkenalkan dua jenis asas yang biasa digunakan oleh semua orang.
1. Kaedah asid kuat (biasa digunakan TFA)
Letakkan resin kering di dalam kelalang shaker dan tambahkan jumlah pemulung yang sesuai ( Scavengers) Reagen membelah asid trifluoroacetic ( TFA), 10-25ml/g Resin, tutup, dan goncang sebentar-sebentar pada suhu bilik. Tapis resin dengan TFA baharu Basuh resin 2-3 kali, gabungkan turasan, dan titiskan tambah 8-10 kali ganda isipadu eter glasier. Kadang-kadang sebahagian daripadanya boleh dikukus daripada TFA Mendakan peptida mentah telah diperolehi. Dietil eter boleh disejukkan dengan ais untuk meningkatkan kecekapan pemendakan. Akhir sekali, kumpulkan peptida mentah yang dimendakan.
Resin yang berkenaan:resin raja atau Rink Amide Resin
2. Kaedah asid lemah (TFA cair atau asid asetik)
1% TFA:
akan 1 g Resin gantung polipeptida-ditambah kepada larutan yang mengandungi 1% TFA Kelalang goncang kaca larutan diklorometana telah dimeterai dan digoncang selama 2 minit. Gunakan nitrogen untuk menuang turasan ke dalam kelalang goncang metanol baharu yang mengandungi 10% piridin. Ulangi operasi di atas sebanyak 10 kali. Gunakan 30 ml DCM, 30ml MeOH Basuh baki peptida terlindung pada resin tiga kali berturut-turut. oleh TLC atau HPLC Periksa sisa pembersihan. Satukan semua turasan dan sejatkan pelarut di bawah tekanan yang dikurangkan untuk meninggalkan isipadu 5%. tambah 40 ml air, dan ais-menyejukkan campuran untuk membantu pemendakan. Selepas penapisan, basuh produk dengan air bersih tiga kali dan letakkan di dalam kotak pengeringan vakum untuk digunakan. KOH atau P2O5 Biarkan kering.
asid asetik cair:
gunakan AcOH/TFE/DCM (2:2:6) Rawat peptida yang tergantung pada resin dengan larutan pemotong selama 2 jam, tapis resin, dan basuh resin tiga kali dengan larutan pemotong. Tambah 15 kali ganda isipadu n-heksana pada turasan campuran dan sejat berputar untuk mengeluarkan asid asetik yang berlebihan. Kaedah pemulihan peptida diperincikan di bawah.
Resin yang berkenaan:2- Resin CTC